Les autoroutes de l'Ontario constituent un réseau d'autoroutes avec accès limité situé dans la province d'Ontario, au Canada. Le fonctionnement du réseau est semblable à celui des Interstate Highway aux États-Unis ou au système autoroutier du Québec. Leur entretien est assuré par le ministère des Transports de l'Ontario. Le système de désignation de routes selon des numérotations variant entre 400 et 499 est créé en 1952, bien que des autoroutes existaient antérieurement en Ontario. Il est à noter que d'autres axes routiers ontariens comportent des sections dites autoroutières, même si elles ne font pas, à proprement dit, partie du réseau autoroutier ontarien.
La conception de ces voies rapides répondent aux standards techniques autoroutiers et la limitation de vitesse imposée aux usagers est de 110 km/h, à l'exception de quelques tronçons qui sont limités à 100 km/h. Leur conception a servi comme modèle pour d'autres autoroutes similaires en Amérique du Nord. Le taux de mortalité sur le réseau relativement au volume de circulation est parmi les plus bas en Amérique du Nord. Les autoroutes sont sous la surveillance policière de la police provinciale de l'Ontario.